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Metodi di ionizzazione di proteine (prof. Salvatore Foti)

Agli inizi degli anni '90 sono state introdotte due tecniche di ionizzazione "Soft" in spettrometria di massa, la ionizzazione electrospray (ESI) e la ionizzazione per desorbimento laser assistito da matrice (MALDI). Tali tecniche, che hanno avuto una rapida diffusione, hanno portato una rivoluzione nell'applicazione della spettrometria di massa nell'analisi di molecole ad elevata massa molecolare, non volatili o termicamente poco stabili, come le biomolecole. L'enorme impatto che queste tecniche hanno avuto nello studio delle proteine è stato riconosciuto con l'attribuzione del premio Nobel per la Chimica nel 2002 a John Fenn per lo sviluppo delle tecnica ESI e a Koichi Tanaka per lo sviluppo della tecnica MALDI. La tecnica MALDI si basa su un processo di desorbimento/ionizzazione effettuato mediante l'interazione tra un raggio laser pulsante di opportuna intensità e un analita solido disperso all'interno di una matrice solida. Vengono prodotti quasi esclusivamente ioni molecolari protonati in modalità positiva e deprotonati in modalità negativa. La selezione della matrice e l'ottimizzazione del protocollo per la preparazione del campione sono le fasi più importanti nell'ottenimento di uno spettro MALDI perché da essi dipende la qualità del risultato. La sorgente MALDI, spesso combinata con un analizzatore di ioni a tempo di volo (TOF), è adatta per ottenere spettri di peptidi o proteine ad elevata massa molecolare, anche in miscela.